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概述

E-Poly? Transfection Reagent是一款性能優(yōu)良的核酸轉(zhuǎn)染試劑，適用于多種細胞的各類DNA、siRNA的高效轉(zhuǎn)染，如HEK293T、HepG2、U87、Hepa1-6、MC38等。具有操作簡便、轉(zhuǎn)染效率高、細胞毒性小、重復性好等優(yōu)勢，該試劑轉(zhuǎn)染效果不受血清和抗生素存在的影響，配制的轉(zhuǎn)染復合物可以直接加入完全培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)染前無需更換無血清培養(yǎng)基。

產(chǎn)品介紹

極簡操作流程

根據(jù)實驗需要按順序混合配制轉(zhuǎn)染復合液：DNA（RNA）溶液（1mg/mL）、Reagent A、Reagent B溶液推薦體積比為1:50:3各組分混勻后，室溫孵育20 min后，進行細胞給藥。

詳實研究數(shù)據(jù)

1. 多種細胞內(nèi)綠色熒光蛋白（GFP）質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率

根據(jù)實驗需要接種細胞過夜，在轉(zhuǎn)染24~48 h后通過熒光顯微鏡觀察GFP表達，根據(jù)熒光顯微鏡下看到的熒光蛋白表達量判斷DNA轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果顯示，E-Poly?轉(zhuǎn)染試劑在多種細胞中GFP轉(zhuǎn)染效率顯著高于T品牌3000（T-3000）、T品牌2000（T-2000）。

圖1.多種細胞內(nèi)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率及綠色熒光蛋白表達量

2. E-Poly?遞送siRNA進行基因敲低

根據(jù)實驗需要接種細胞過夜，換液后加入siGAPDH轉(zhuǎn)染復合液，轉(zhuǎn)染24 h后測定GAPDH和β-Actin的mRNA表達水平。結(jié)果顯示，E-Poly?在HEK293T和HepG2細胞上siRNA敲低效率較T-3000更優(yōu)，但E-Poly?和T-3000的siRNA敲低效率顯著低于CALNP? RNAi in vitro（貨號：DN001-10，下面同）轉(zhuǎn)染試劑。

圖2.多種轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染siRNA基因敲減效率比較

3. E-Poly?共轉(zhuǎn)質(zhì)粒及siRNA

根據(jù)實驗需要接種細胞，E-Poly?、T-3000和T-2000組同時反向轉(zhuǎn)染Fluc-質(zhì)粒及siRNA，24 h后加入熒光素底物測定熒光水平；E-Poly?+CALNP?組采用E-Poly?轉(zhuǎn)染質(zhì)粒6 h后，換液加入siRNA-CALNP?轉(zhuǎn)染復合液，轉(zhuǎn)染24 h后加入熒光素底物測定熒光水平。結(jié)果顯示，E-Poly?在HEK293T和HepG2細胞上轉(zhuǎn)染Fluc-質(zhì)粒蛋白表達效率顯著高于T-3000和T-2000，共轉(zhuǎn)siRNA后敲低效率略優(yōu)于T-3000，顯著優(yōu)于T-2000組；而E-Poly?+CALNP?聯(lián)用組siRNA用量更低（siRNA：70 nM vs.10 nM），但Fluc基因敲減效率更優(yōu)。

注：T-2000、T-3000及E-Poly?組，si-Fluc-RNA濃度為70 nM；E-Poly?+CALNP?組，si-Fluc-RNA濃度為10 nM

圖3.多種轉(zhuǎn)染試劑共轉(zhuǎn)質(zhì)粒DNA和siRNA過表達和基因敲減比較